Что такое анализ крови на ифа

Комментарии пользователей

Хватит себя обманывать

Прежде чем читать дальше, я задам вам 1 вопрос. Вам знакома такая ситуация, когда человек годами лечится от хронических болезней, а результатов никаких?

У многих людей, ведущих здоровый образ жизни и правильно питающихся, не наблюдается значительных улучшений состояния здоровья из-за наличия у них паразитов. Оздоровление организма с помощью питания, упражнений, закаливающих процедур без предварительного избавления организма от паразитов дает гораздо меньший эффект.

Думаете, что вас это точно не касается и паразиты могут быть у кого угодно, но только не у Вас? Вы ошибаетесь!

Если вы или ваши близкие страдаете «популярными» заболеваниями и традиционные лекарства вам не помогают — незамедлительно начните очищение организма.

Проверенный препарат, который ‘убивает’ всех известных паразитов — это Toximin. Данный препарат не продается в аптеках и его не рекламируют в интернете, а по акции стоит он всего 196 рублей. 

Всю информацию о Toximin читайте на официальном сайте. 

Самый волнительный из иммуноферментных анализов – ИФА на ВИЧ

Анализ на ВИЧ, пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.). К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков. Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории. Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.

ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций, предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным. Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок. Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.

Что можно ожидать от результатов на ВИЧ?

ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).

Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:

1. Первичный положительный результат: кровь подлежит перепроверке на тест-системе такого же типа, но по возможности другой серии и другим человеком (лаборантом);
2. Повторный (+) предполагает новый забор крови у пациента с исследованием ее подобно первичному анализу;
3. Очередной положительный результат подлежит референтному анализу, при котором используются высокоспецифичные тест-наборы (2-3 шт.);
4. Положительный результат в обеих (или в трех) системах направляется на иммуноблотинг (тот же ИФА, но выполненный в индивидуальном порядке на тест наборах особо высокой специфичности).

Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию.

Когда назначается иммуноферментный анализ крови

Существует множество показаний для проведения ИФА диагностики. Наиболее распространенными целями данного обследования являются:

1. Диагностика инфекционных заболеваний (вирусные гепатиты, ВИЧ, ЦМВ, ВЭБ, герпес, ветряная оспа, хеликобактер, заболевания передающиеся половым путем, токсоплазмоз, краснуха, корь и многие другие).
2. Отслеживание эффективности вакцинации (наиболее актуальным является оценка титра антител к столбняку у лиц, получивших травму, с целью решения вопроса о введении профилактической прививки и/или анатоксина).
3. Общая оценка показателей иммунитета, диагностика некоторых аутоиммунных патологий (системной красной волчанки, гломерулонефрита, тиреоидита).
4. Выявление некоторых онкомаркеров (ФНО, РЭА, ПСА).

Также с помощью иммуноферментного анализа определяется концентрация тестостерона, пролактина, прогестерона, ТТГ и других гормонов.

Особенности проведения исследования 

Материалом для исследования чаще всего служит сыворотка крови. Для этого в лаборатории берут венозную кровь. Для получения достоверного результата, забор биоматериала следует проводить утром натощак после 8-10 часового голодания. Это необходимо для того, чтобы кровь не свернулась, а плазма не стала мутной.

В дальнейшем из крови с помощью центрифугирования удаляются форменные элементы, затрудняющие диагностику (эритроциты, тромбоциты, лейкоциты), и проводят непосредственно ИФА анализ. При нем в полученный образец добавляется небольшое количество специфических антигенов. Полученная положительная реакция говорит о присутствии инфекции в организме или наличии иммунитета к ней.

Материалом для исследования также могут служить: ликвор, слезная жидкость отделяемое из глаз, урогенитальные и цервикальные мазки, околоплодные воды.

Срок выполнения анализа в среднем составляет 1-2 суток. При необходимости быстрого получения ответа в случае подозрении на некоторые опасные патологии, ИФА может быть выполнен в течении 2-3 часов.

Интерпретация анализа 

Расшифровкой полученных результатов, когда сдан иммуноферментный анализ крови, должен заниматься лечащий врач, оценивая их в комплексе с клинической картиной болезни и другими методами диагностики (общий и биохимический анализ крови, полимеразная цепная реакция и т. д.)

Результаты могут быть следующими:

• Положительный IgM говорит об остром течении инфекционного заболевания. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии болезни (организм не встречался с возбудителем), так и о хронизации процесса или выздоровлении. Также отрицательный результат может говорить об отсутствии иммунного ответа (у лиц с иммунодефицитными состояниями, после трансплантации органов и костного мозга, принимающих иммуносупрессию, химиотерапевтические препараты).
• Наличие IgA при отсутствии IgM обычно говорит о скрытой, бессимптомной инфекции. Либо о том, что с момента заражения прошло 1-2 суток и специфические антитела класса М не успели выработаться.
• Положительные результаты IgM и IgA одновременно — свидетельствует о разгаре острой фазы заболевания.
• Появление в крови IgG к инфекционному агенту говорит о переходе патологии в хроническую стадию, либо о выздоровлении и выработке естественного (а в случае вакцинации искусственного) иммунитета к патогену.

С целью уточнения диагноза при отрицательном или сомнительном результате первого анализа, при наличии явной клиники инфекционного процесса, повторить исследование рекомендуется спустя 14 суток, т. к. спустя данный промежуток времени в большинстве случаев организм успевает выработать достаточное количество антител.

Реклама партнеров

Как проводится?

Главная особенность ИФА — высокая точность данных.  Позволяет не просто обнаружить антитела, но и определить их количественное соотношение.

Это значит, что иммуноферментный анализ позволяет с 99,99%-ной вероятностью выявить болезнь и одновременно определить, на какой стадии развития болезнь в данный момент находится.

При проведении ИФА у пациента берут кровь из вены. Затем ее особым образом подготавливают и размещают на полистироловой панели со множеством лунок. При диагностике в сыворотку крови добавляют специальные ферменты, которые при наличии антител/антигенов недуга образуют с ними прочные соединения.

Результатом образования таких соединений становится изменение цвета плазмы крови в лунке (с бесцветного — на ярко-желтый). Работнику лаборатории достаточно визуально оценить результат, чтобы понять, что на панели — кровь больного.

Анализ ИФА – что это значит

ИФА — официальное название современного способа тестирования на антитела. Аббревиатура расшифровывается как «иммуноферментный анализ».

Этот тест фактически пришел на смену другому тесту на анитела — радиоиммунному анализу, который выявлял антитела с помощью радиоактивных изотопов. Новый метод показал большую точность и, плюс к тому, не нес никакой опасности для здоровья, так как в нем используются исключительно биологические препараты.

В 1971 году ИФА был независимо разработан двумя группами ученых — Питером Перлманном и Евой Энгвалл из Стокгольмского университета, а также голландскими исследователями Антоном Шуурсом и Боке ван Вименом.

В ИФА выработка антител на вирус маркируется и обнаруживается определенным ферментом. Высокая стабильность материалов (антитела могут жить в организме много лет), простота, относительно низкая цена и другие достоинства метода способствовали его широкому внедрению не только в медицине, но и в сельском хозяйстве, пищевой промышленности, охране окружающей среды и других научных исследованиях.

96-луночный микропланшет, используемый для ИФА. Фото: Википедия

Суть метода

Иммуноферментное исследование — инструментально-лабораторная методика, построенная на молекулярной реакции «антиген-антитело», позволяющая обнаруживать специфичные белки в биологических материалах (образцах для исследования).  Такими белками могут быть энзимы, разнообразные микроорганизмы (вирусы, бактерии, грибки), простейшие и т. д.

Основной принцип метода заключается в молекулярной реакции «антиген-антитело».

Антигеном является любая чужая молекула, попавшая в человеческий организм в составе микроба-возбудителя болезни. Антигены представляют собой, как правило, белковые молекулы. Кроме микроорганизмов таким «чужаком» могут быть клетки чужой крови, не совпадающие по группе или резус-фактору.

В ответ на попадание такого антигена в организме запускается иммунная реакция, которая направлена на защиту от любых чужих молекул. Это происходит за счет синтеза специальных агентов иммунной системы — антител (иммуноглобулинов). Каждое антитело подходит только к определенному антигену, и нейтрализует патогенного «чужака», связываясь с ним в единый комплекс. Именно процесс такого связывания и называют реакцией «антиген-антитело».

Виды антител

Все антитела (иммуноглобулины) делятся на 5 видов в зависимости от того, на каком этапе иммунного ответа они появляются:

• Класс М (IgM). Всплеск таких иммуноглобулинов наблюдается в течение нескольких первых суток после внедрения инфекции или другого патогенного агента. Приблизительно через 6 недель они начинают растворяться и исчезать.
• Класс G (IgG). Синтезируются на втором этапе, чтобы побороть болезнь. После полной ликвидации чужих молекул они продолжают присутствовать в крови в небольшом количестве для обеспечения иммунитета на случай повторного заражения.
• Класс А (IgА). Такие иммуноглобулины отвечают за защитные функции слизистых оболочек организма, через которые патогенным элементам проникнуть легче всего, так как слизистый эпителий гораздо тоньше и нежнее обычных кожных покровов.
• Класс Е (IgЕ). Эти специфические глобулины направляют свое действие против паразитарных инфекций, поражающих организм человека. Они появляются вне зависимости от того, какая система органов поражена паразитами.
• Класс D (IgD). Этот класс всегда обнаруживается даже у здоровых людей. У детей до 10 лет он постепенно нарастает, после чего его количество при условии абсолютного здоровья не изменяется. Если же показатель увеличивается выше нормы, то это может свидетельствовать о наступившей беременности, астмы, иммунодефицита и пр.

Для ИФА-диагностики чаще всего важны уровни иммуноглобулинов IgG, IgM и IgA. По их титрам можно узнать, переболел ли человек болезнью раньше или заразился в недавнем времени, выработался ли у него иммунитет или его организм беззащитен перед патологией.

Что такое иммуноферментный анализ?

Иммуноферментный анализ крови — это один из способов лабораторной диагностики, который основан исключительно на реакции под названием «антиген-антитело». Здесь стоит уяснить, что антиген — это чужеродное белковое соединение (молекула), попавшее в организм человека с паразитарной, вирусной или другой инфекцией. То есть, попросту вредитель. В свою очередь антитело — это иммунная клетка (иммуноглобулин), встающая на защиту организма человека при обнаружении в нем чужеродных молекул.

Выработку антител провоцируют сами же антигены, проникшие в организм человека. При вступлении в «битву» за здоровье организма антитела как бы помечают собой антигены, что при исследовании крови и видит лаборант. То есть в забранном биоматериале можно отследить не только наличие инфекции, но и ее следы уже после того, как организм полностью выздоровел.

При проведении анализа на ИФА лаборант может видеть такие иммуноглобулины к антигенам:

• Иммуноглобулины М (в результатах значатся как IgM). Свидетельствуют о том, что инфекционный процесс в организме только набирает свою силу. То есть инфицирование произошло совсем недавно;
• Иммуноглобулины G (значатся как IgG). Способствуют уничтожению антигенов через несколько дней после внедрения инфекции в организм человека. Иммуноглобулины G могут находиться в организме пациента достаточно долго, формируя иммунитет к определенному вирусу;
• Иммуноглобулины Е (значатся как IgЕ). Свидетельствуют о паразитарных инфекциях в организме. Он же говорит и об атопических реакциях при аллергии. При этом стоит знать, что проведение анализа ИФА дает результат с точностью 90% на паразитарные инфекции;
• Иммуноглобулины А (значатся как IgА). Максимально выступают на защиту слизистых оболочек пациента.

Таким образом, назначая иммуноферментный анализ крови пациенту, лечащий врач может отследить давность инфекции, степень ее прогрессирования или выявить наличие иммунитета к той или иной инфекции.

Процесс ИФА диагностики выглядит таким образом:

• Забранная венозная кровь приводится в лаборатории в состояние сыворотки крови;
• Затем лаборант использует специальный лоток с ячейками, в каждой из которых уже имеются все необходимые антигены. Достаточно просто капнуть в каждую ячейку сыворотку крови и отследить реакцию иммуноглобулинов (антител) на антигены. О наличии «нужной» реакции свидетельствует изменение цвета исследуемого материала. В дальнейшем лаборант изучает оптическую плотность исследуемой среды.

В целом иммуноферментный анализ на паразитов помогает выявить такие паразитарные патологии:

• Аскаридоз и энтеробиоз (аскариды и острицы);
• Трихинеллез;
• Описторхоз в острой и хронической формах;
• Лямблиоз;
• Амебиоз;
• Токсоплазмоз;
• Лейшманиоз в любой форме.

Иммуноферментный анализ сыворотки крови

Сыворотка крови – это прозрачная жидкость с желтым оттенком. После свертывания крови она отделяется от кровяного сгустка. Не содержит фибрина и форменных элементов.

Иммуноферментный анализ сыворотки крови основан на взаимодействии антигена с антителом, причем один из них содержит в своей структуре фермент. При взаимодействии двух компонентов содержимое пробирки должно менять свой цвет. Результаты сравниваются со стандартной цветовой шкалой, и далее устанавливается антиген, который присутствует в материале. Другими словами принцип иммуноферментного анализа сыворотки крови можно объяснить так:

1. подготавливаются наборы антигенов (например, возбудители инфекционных заболеваний, аллергены или гормоны);
2. пациент сдает кровь на анализ, из которой в лаборатории выделяется сыворотка;
3. материал для исследования добавляется в лунки готовых наборов, после чего возникает реакция антиген-антитело;
4. оставшаяся сыворотка крови убирается, а обнаруженные антитела распознаются при помощи индикаторов.

Иммуноферментный анализ сыворотки крови считается достоверным. Но в тех случаях, когда произошло неправильное взятие крови для анализа, или была нарушена техника проведения исследования, или же имеются у человека скрытые системные заболевания, результаты иммуноферментного анализа сыворотки крови могут оказаться ложными.

Иммуноферментный анализ сыворотки крови исследует практически все гормоны щитовидной железы, онкомаркеры и различные виды инфекций.

К гормонам щитовидной железы относятся тиреоглобулин (ТГ), тироксин (Т4), трийодтиронин (Т3), свободный тироксин (Т4), свободный трийодтиронин (Т3).

Нормы

Иммуноферментный анализ крови в норме считается, если присущи такие допустимые нормы гормонов щитовидной железы:

• тиреоглобулин (ТГ) – допустимые границы 70 МЕ/мл;
• тироксин (Т4) – 64-146 нмоль/л (50-113 нг/мл);
• трийодтиронин (Т3) – 1,8-2,8 нмоль/л (0,8-2,0 нг/мл);
• свободный тироксин (Т4) – 11-25 пмоль/л (10-27 пг/мл);
• свободный трийодтиронин (Т3) – 4,49-9,3 пмоль/л (2,5-5,8 пг/мл).

В случае исследования половых гормонов иммуноферментный анализ крови в нормедля женщин считается, если в организме выделяется лютеинизирующий гормон (ЛГ) в таких пределах:

• фолликулярная фаза цикла (с первого дня месячных до двенадцатого-четырнадцатого) – 2-14 мЕд/л;
• овуляционная фаза цикла (с двенадцатого дня по четырнадцатый день) – 24-150 мЕд/л;
• лютеиновая фаза цикла (с пятнадцатого-шестнадцатого дня и до начала следующих месячных) – 2-17 мЕд/л.

В норме для мужчин принимается, если половой гормон вырабатывается в пределах 0,5-10 мЕд/л.

При исследовании хронического гонадотропина (ХГ) референсные значения зависят от пола человека.

• У взрослых мужчин и небеременных женщин нормой считается уровень ХГ ниже 5мЕд/мл.
• У беременных женщин результат зависит от срока беременности и может колебаться в пределах 25-49000 мЕд/мл.

Иммуноферментный анализ крови исследует множество онкологических показателей. К ним можно отнести наличие пролактина, эстрадиола, прогестерона, тестостерона, стероид связывающего глобулина (ССГ) и других маркеров. Но интерпретация результата анализа и норм этих показателей должна проводиться только лечащим врачом.

Кроме того, данный метод диагностирует инфекционные (например, краснуха, корь, туберкулез, герпес, сифилис, гепатит, псевдотуберкулез) и аутоиммунные заболевания разного вида, а также устанавливает иммунный статус человека. Но все показатели и полученные результаты должны расшифровываться квалифицированным специалистом.

Какая диагностика лучше методом ПЦР либо ИФА

После рассмотрения особенностей каждого из анализов становится ясно, что ИФА и ПЦР диагностики уникальны и эффективны каждая по-своему. Исследования ПЦР и ИФА не могут составлять конкуренцию друг другу, но способны отлично дополнять одно другое. Особенно в случаях получения сомнительных результатов, когда симптомы свидетельствуют об одном, а лабораторное исследование о противоположном.

Бывают иногда случаи, когда анализы ИФА или ПЦР срабатывают ложно отрицательно либо ложно положительно. Постановить окончательный диагноз могут помочь дополнительные исследования, такие как иммуноблотинг для иммуноферментного анализа. Что касается полимеразной цепной реакции, то этот метод более точный, ― вот и главная разница между ПЦР и ИФА. Но это не единственное свойство, которым отличается ПЦР и ИФА.

Отличия ИФА и ПЦР диагностических методов:

1. Иммуноферментный анализ позволяет установить лишь факт контакта организма с возбудителем инфекции. В то время как при помощи полимеразной цепной реакции возможно определить какой именно возбудитель проник в организм.
2. Благодаря ИФА, реально подтвердить или опровергнуть факт распространенности инфекционного процесса в любом участке организма. Метод ПЦР же предназначен для обнаружения возбудителя только в исследуемом образце, то есть биологических жидкостях, фрагментах органов и тканей, которые были предоставлены для исследования.
3. Для проведения иммуноферментного анализа пригоден абсолютно любой материал для исследования (кровь, моча, слюна, частички органов и тканей). Потому как иммуноглобулины при ответе организма на проникновение возбудителя могут находиться где угодно. Для исследования путем полимеразной цепной реакции берется тот биологический материал, где предположительно может присутствовать возбудитель.

Как видно из перечисленных особенностей каждого лабораторного исследования различия между ИФА и методом ПЦР существенные. Если коротко сформулировать, то ИФА направлен на обнаружение продуктов жизнедеятельности белков-маркеров. А ПЦР нацелен на установление конкретного возбудителя, который может относиться к группе бактерий, вирусов или грибков. Поэтому не редки случаи, когда лечащий врач может назначить одновременно оба вида диагностики как ИФА, так и ПЦР. С той лишь целью, чтобы сразу получить полномасштабную клиническую картину о происходящих патологических процессах внутри организма пациента. Чаще, чем с другими патологиями, проводится одновременное исследование методом ПЦР, а также ИФА, при инфекциях, полученных половым путем (ИППП).

Теперь, если когда-нибудь станет выбор, какой вид диагностики предпочесть ПЦР либо ИФА, у человека, ознакомившегося с предложенной информацией, вопросов не возникнет. Когда речь идет о здоровье, дабы не допустить развития инфекционного процесса до неизлечимой стадии. Лучше сделать полное обследование, чтобы обнаружить инфекцию как можно раньше и провести своевременное лечение. Либо полностью опровергнуть присутствие какого-либо возбудителя и, что называется, «спать спокойно».

Если ИФА на ВИЧ положительный что делать?

Получить результат можно либо положительный, либо отрицательный, промежуточных вариантов не существует. Нельзя забывать, что существует некоторый процент погрешности, и чем меньше срок, тем неточность выше.

ИФА на ВИЧ положительный – это не приговор и не окончательный ответ. Существует ряд причин, по которым ответ выходит ложноположительным.

• Затяжная болезнь вирусной природы;
• Беременность;
• Хроническое инфекционное заболевание.

Ослабленный иммунитет может привести к ошибкам при постановке диагноза, потому результаты нужно перепроверять.

ВИЧ ИФА положительный что это значит? Это значит, что требуется дополнительные исследования. Если контакт с вирусом иммунодефицита произошел недавно, и тест проводится в первый раз, то сильно волноваться не нужно. Потребуется или повторить тест через некоторое время, или попробовать другой метод определения ВИЧ. Более точные методики предполагают повышенную стоимость, но в борьбе за свою жизнь такие траты оправданы.

Анализ ИФА положительный ВИЧ не обязательно является диагнозом. Говорить о высокой точности анализа можно только на поздних сроках заболевания, к этому времени у больного, вероятно, уже проявятся очевидные внешние признаки заболевания. Поэтому исследовать организм всеми доступными способами и средствами нужно как можно раньше.

В качестве дополнительных анализов доктора назначают либо иммуноблоттинг, либо же тест на вирусную нагрузку. Это все в совокупности дает наиболее полное представление о состоянии здоровья и позволяет строить прогнозы относительно будущего обследуемого пациента.

Антиретровирусная терапия ВИЧ назначается только после теста на вирусную нагрузку. Поэтому в случае положительного ИФА теста на ВИЧ в любом случае придется проводить и другие исследования, чтобы определить не только факт болезни, но и концентрацию вируса в жидкостях организма. Не нужно также удивляться повтору анализа даже после постановки диагноза, потому что следить за жизнедеятельностью вирусной массы необходимо и в ходе терапии.

Отрицательный результат ИФА

Отрицательный результат ИФА правдив примерно на 98%, положительный нельзя с первого раза принимать на веру, приходится перепроверять, и желательно не однократно. Рекомендуется для максимально точного результата проводить одинаковые анализы в двух разных лабораториях, это исключает вероятность ошибки из-за человеческого фактора.

Немного цифр и статистики. По данным лечебных центров, в 99,5% случаев вирус легко обнаруживается в течение 6 месяцев после заражения. Нечасто случается, что на протяжении года не получается определить статус. Средняя вероятность ошибки при обследовании на ВИЧ 2%, точность зависит и от уровня лаборатории, и от состояния здоровья.

*Важно помнить, если анализ ИФА на ВИЧ все же выявил заболевание, не стоит огорчаться раньше времени. В настоящее время существует целый список антиретровирусных препаратов от ВИЧ, которые помогут в борьбе с болезнью и не дадут ей перейти в крайнюю форму — СПИД

Как делают анализ

После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.

Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:

• Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
• Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
• Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.

В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.

Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.

При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.

Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.

При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.

Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.

Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.

Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.

Преимущества метода ИФА

Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке.

Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.